Durchflusszytometrie (FACS ®)
Dr. Steffen Schmitt
Dank der technischen Weiterentwicklung sowie durch den Einsatz neuartiger Fluoreszenzfarbstoffe hat sich der Einsatzbereich der Durchflusszytometrie in den letzten Jahren ständig erweitert. Ursprünglich als Methode in der Immunologie und Hämatologie (Routine-Diagnostik) entwickelt, wird die Durchflusszytometrie heute auch vermehrt in anderen biowissenschaftlichen Bereichen und in der medizinischen Grundlagenforschung eingesetzt.
Grundlage einer FACS®-Analyse (fluorescence activated cell sorting) ist eine (gefärbte) Einzelzellsuspension (oder andere lösliche Partikel), wobei diese einzeln einen fokussierten Laserstrahl passieren und das dabei erzeugte, charakteristische Streu- und Fluoreszenzlicht separat detektiert wird. Mit dieser Methode lassen sich relativ große Zellzahlen in vergleichsweise kurzer Zeit analysieren (bis zu 30.000 Zellen/ Sekunde). Die Zahl der analysierbaren Parameter steigt mit der Zahl der eingesetzten Laser und Fluoreszenzfarbstoffe. Das neueste Zellsortiergerät am DKFZ kann auf Einzelzellebene 19 Parameter gleichzeitig mit der oben erwähnten Durchflussgeschwindigkeit detektieren und 4 Subpopulationen gleichzeitig sortieren.
Zur Färbung der Zellen werden meist fluoreszenzfarbstoff-markierte Antikörper eingesetzt, die spezifisch Strukturen auf den Zellen erkennen und markieren. Durch geeignete Wahl und Zusammensetzung der einzelnen Marker mit unterschiedlichen Fluoreszenzfarbstoffen lassen sich in einem Färbeansatz theoretisch mehrere Dutzend Subpopulationen unterscheiden.
Die Zytometrie Core Facility am DKFZ berät und unterstützt als zentrale Serviceeinrichtung die Wissenschaftler in der Planung, Durchführung und Auswertung von FACS®-Analysen und Zellsortierung. Dazu stehen moderne Geräte, 7 Analysegeräte und 4 Zellsortierer, sowie verschiedene Softwaremodule zur Verfügung. Außerdem ist die Durchflusszytometrie Serviceeinheit an der Aus- und Fortbildung der DKFZ-Mitarbeiter und Doktoranden beteiligt. Das Kursangebot kann über die Abteilung Aus- und Weiterbildung eingesehen werden.
Die Nutzung der Analyse-Geräte ist zur Zeit nach vorheriger Schulung (Teilnahme am FACS®-Kurs bzw. Einweisung durch die Operatoren) und Anerkennung unserer Guidelines eigenverantwortlich. Die Bedienung der Zellsortier-Geräte obliegt ausschließlich den Operatoren. Zur Vereinbarung von Sort-Terminen senden Sie bitte eine E-Mail an unten genannte Adresse.
Für DKFZ-Mitarbeiter und Kooperationspartner stehen im Intranet weitere Informationen zu unserem Angebot und Ausstattung zur Verfügung (siehe unten).
Für weitere Fragen stehen wir jederzeit gerne zur Verfügung.
Dr. Steffen Schmitt
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